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레포트 자료실 세균의 염색기법

 

[레포트] 세균의 염색기법

 

[세균의 염색기법]

단순염색(simple staining)

 

세포를 염색하기 위하여 한 가지 생물학적 염료(biological dye)를 이용하는 염색방법 이다. 동물세포의 경우 메틸렌블루를, 식물세포의 경우엔 아세트산카민을 주로 사용한다. 미생물학에서 사용되는 생물학적 염료는 발색단을 포함하는 약 유기산(weak organic acid)의 염(salt)이다. 만약 발색단이 양전하(양이온)를 띄게 되면 그것은 염기성 염료라 부르고, methylene blue, crystal violet, 그리고 safranin과 같은 대표적인 염기성 염료들은 일반적으로 세균 세포들을 염색하는데 사용된다.

 

세균세포들이 염색되면 크기, 형태, 그리고 세포의 배열 같은 특징들이 쉽게 식별된다. 대부분의 세균은 0.2㎛부터 5㎛, 또는 그 이상의 크기를 나타낸다. 대부분의 세균세포에서 나타나는 모양은 구형(spherical 또는 coccus), 막대모양(rod 또는 bacillus), 나선형(spiral 또는 helical)이다. 그러나 가끔 난형(oval 또는 coccobacillus), 짧게 굽은 형(comma형, vibrio형), 스피로헤타형, 그리고 다 형태(pleomorphic)의 생물체가 관찰되기도 한다. 다 형태 생물체는 한 가지 형태만을 나타내지 않기 때문에 순수배양에서 다 형태 생물체는 여러 가지 다른 세포형태로 동시에 발견된다.

 

세균은 형태학적으로 여러 가지 종류를 나타내고 있을 뿐만 아니라 세포의 배열에서도 다양함을 보여준다. 구균(cocci)의 배열은 단일세포(monococcus), 쌍(diplococcus), 짧거나 긴사슬(streptococcus), 덩어리(staphyloccus), 사분자(tetrad), 8, 16 또는 32세포의 입방형 배열(sarcina)로서 관찰될 수 있다. 구균의 다른 배열은 세포 분열이 일어나는 방법에 따라 달라질 수 있다.

 

[염색 표본의 제작]

1. 탈지

2. 도말(smear)

slide glass에 도말을 하기 전 slide glass의 청결이 중요하다. slide glass에 묻어있는 지방 제거를 위해 slide glass를 alcohol에 담궈 두었다가 깨끗한 거즈로 닦아 사용하면 좋다. slide glass의 전면에 loop로 물이나 균 액을 도말해 보아서 잘 펴지면 탈지가 잘 된 것으로 간주한다. 탈지가 충분치 않으면 세균의 고정이 되지 않아 염색 시 흘러내려가 버린다. 도말은 가능하면 얇고, 둥글고, 편평하게 한다. 고체배지에서 자란 균을 도말할 때는 약간만 풀어 얇게 혼합하여 도말한다.

3. 건조(dry)

slide glass에서 도말한 표본은 공기 중에서 자연건조 시킨다.(대략 10~20분 소요)

4. 고정(fixation)

염색 시에 도말한 세균이 떨어져 나가지 못하게 하기 위해 slide glass에 세균을 완전히 밀착시키는 것을 고정이라 한다. 고정 시에는 불꽃의 열을 가해 실실하는데 주의 할 점은 너무 태우지 말아야 한다는 것이다. 보통 3~4회 불꽃을 통과시키면 된다.

5. 염색(staining)

세균을 염색할 때는 반드시 도말, 건조, 고정을 거친 후 실시한다. 염색방법들은 그 목적에 따라 다양하게 수행한다.

6. 수세(washing)

염색액이나 매염제, 탈색제, 대조 염색액을 물로 씻어내는 과정이다. 이 때는 약하게 흐르는 수돗물로 slide glass 도말 뒷면에 대고 씻어 염색액이 씻겨 나갈 대까지 서서히 씻는다(약 2-5초간)

7. 건조(dry)

수세한 slide glass 표본을 여과지 사이에 넣어 가볍게 눌러 수분을 흡수시키고 공기 중에서 건조시킨다.

8. 검경(microscopic finding)

slide 표본을 재물대 위에 놓고 저배율(100x)로 물체를 확인한 후 고배율로 보면서 관찰한다. 이 때 세균의 형태, 크기, 배열 등을 조심스럽게 관찰하고 스케치 한다.

 

 

그람염색(Gram Staining): 분별염색 기법

 

분별염색(differential staining)은 세균의

 

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